中药芪参复康对焦虑模型大鼠βEP及细胞因子的影响

作者：用户投稿来源：网络发布时间： 13/12/21

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　　【摘要】目的：对中药芪参复康 (QSFK) 胶囊抗焦虑作用的神经免疫调节机制进行初步探讨. 方法：采用国际通用的高架十字迷宫模型(EPM)焦虑动物模型，用丁螺环酮(Bus)作对照，观察QSFK对EPM大鼠βEP，血清NO，IL1β，IL6和TNFα的影响. 结果：与模型组比较，QSFK和Bus均能降低EPM大鼠血浆βEP含量(P<0.01)，对下丘脑βEP水平无明显影响;但两组均能升高EPM焦虑模型大鼠血清NO水平(P<0.05);QSFK还可升高EPM大鼠血清IL1β和TNFα水平，对IL6含量无明显影响;Bus并不能改变此焦虑模型大鼠的血清细胞因子水平. 结论： QSFK降低血浆βEP含量，提高血清NO浓度和EPM血清IL1β和TNFα水平，以调节焦虑状态下机体免疫功能紊乱.

　　0引言

　　芪参复康 (qishenfukang, QSFK) 胶囊是我院临床主要用于治疗肝血不足，血不养心，虚热内扰之虚烦不得入眠引起的焦虑症方剂. 以往实验结果表明，QSFK胶囊可增加动物的自发活动，增强其体力，并能逆转强制冷水游泳应激所致肾上腺VitC含量的变化，显示该制剂具有抗应激和抗焦虑作用. 我们采用国际上通用的焦虑动物模型高架十字迷宫模型(the elevated plusmaze test, EPM)，观察了QSFK对EPM大鼠β内啡肽(βEP)、血清一氧化氮(NO)、白细胞介素1β(IL1β)、白细胞介素6(IL6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)等细胞因子水平的影响，对本方抗焦虑作用的神经免疫调节机制进行初步探讨.

　　1材料和方法

　　1.1材料SD品系雄性大鼠，体质量(180±10)g，由西安交通大学实验动物中心提供. QSFK胶囊是由炙黄芪15 g、西洋参10 g、白术10 g、天麻10 g、枸杞子10 g、熟地黄10 g、白芍10 g、阿胶10 g、丹参10 g、当归10 g、川芎10 g、淫羊藿10 g、酸枣仁15 g、远志10 g、茯苓10 g、鹿茸5 g中药材组成. 由本院中药制剂中心提供，0.3 g/粒. 丁螺环酮片剂(buspirone, Bus)5 mg/片，为西南合成制药股份有限公司产品. 研钵粉碎后用蒸馏水溶解，加入20 g/L羧甲基纤维素钠1～2滴充分混匀，配成100 g/L浓度. 4℃保存，使用前混摇均匀. βEP放免试剂盒由第二军医大学神经生物学教研室提供;IL1β，IL6，TNFα放免试剂盒由解放军总医院科技开发中心放免研究所提供; DigBehvEPMR型大鼠高架十字迷宫为上海吉量软件科技有限公司产品;SN695B型智能放免γ测量仪为上海核所日环光电仪器有限公司产品;DU7型紫外分光光度计为美国Beckman公司产品.

　　1.2方法大鼠每笼10只，不限食水. 室温(18±2)℃，保持安静. 将大鼠随机分为模型,BUS, QSFK共3组，每组10只. 其中QSFK组按1.2 g/(kg·d)给予灌胃，Bus组给予1 mg/(kg·d)灌胃，模型组灌服等容积的生理盐水. 各组连续给药10 d，末次给药1 h后做行为学测试. 大鼠EPM行为学测试结束后，立即断头处死，迅速在冰盘上剪开颅盖和脑膜，分离下丘脑，称质量，制成匀浆，加入1 mol/L HAC 1 mL，室温放置2 h，再加入1 mol/L NaOH 1 mL，中和酸，4℃，4000 r/min，离心20 min，取上清液，置-20℃冰箱保存待测下丘脑βEP;断头取血，其中2 mL置于加入0.3 mol/L EDTA2Na 40 μL和抑肽酶40 μL抗凝剂的试管中，4℃，4000 r/min，离心20 min，取血浆，待测血浆βEP;其余血液室温放置，3000 r/min，离心20 min，取血清，-20℃冰箱保存待测NO, IL1β, IL6, TNFα. 其中NO测定按照NO试剂盒(南京生物医学制剂公司)说明在DU7型紫外分光光度计上测定NO浓度. βEP, IL1β, IL6, TNFα均采用放免法严格按试剂盒说明书方法进行测定.

　　统计学处理：各组数据用x±s表示，采用单因素方差分析(Oneway ANOVA)及Student Newman Keuls检验，全部数据用SPSS 11.0 for windows统计软件处理.

　　2结果

　　2.1QSFK对EPM大鼠βEP的影响与模型组比较，Bus和QSFK组大鼠下丘脑βEP水平无统计学差异(P>0.05)，但血浆βEP含量降低(P<0.05, P<0.01);血清NO水平均升高(P<0.05)，其中QSFK组升高更为明显(表1). 表1QSFK对EPM大鼠βEP和NO的影响

　　2.2QSFK对EPM大鼠血清细胞因子的影响与模型组比较，QSFK组大鼠血清IL1β, TNFα水平升高(P<0.05)，但血清IL6含量变化无统计学意义(P>0.05);Bus组大鼠的血清IL1β, IL6 和 TNFα均无统计学意义(表2). 表2QSFK对EPM大鼠血清免疫细胞因子水平的影响

　　3讨论

　　焦虑症可能通过神经内分泌免疫机制对机体健康产生广泛影响. 我们分别选取中枢神经、免疫系统与焦虑发病密切相关的神经调质、免疫细胞因子为观测指标，探察QSFK对EPM模型大鼠相关指标的影响，以探讨其与抗焦虑作用可能有关的神经免疫调节机制. 研究发现，焦虑与脑干的LC神经释放增加有关，能抑制LC释放βEP的药物被认为具有抗焦虑作用. 因此神经肽与焦虑的关系近来倍受关注. 本结果显示，QSFK可显著降低EPM大鼠血浆βEP水平，对中枢βEP无明显影响，推测QSFK可能抑制了焦虑应激状态下垂体βEP的释放，或者直接作用于肾上腺髓质而抑制了βEP的产生. 我们发现，QSFK可降低EPM大鼠血浆βEP水平，推测其有可能通过抑制EPM焦虑状态下的βEP释放以减少5HT的释放，改善焦虑状态;同时还可通过降低外周βEP水平，减弱βEP对免疫抑制作用，以改善焦虑症可能出现的免疫功能紊乱.

　　NO被认为是焦虑障碍的神经生物化学机制之一,有研究报道焦虑患者血中NO浓度显著降低. 我们观察到，1 mg/kg Bus可以明显升高经EPM探究后大鼠血清NO水平，推测作为抗焦虑药物Bus的抗焦虑作用除了已经了解到的对中枢神经递质、调质影响之外，可能还包括对NO调节的机制，值得进一步研究. 实验结果还显示，QSFK也可显著升高EPM大鼠血清NO水平，提示其抗焦虑作用可能与提高血清NO浓度有关. 免疫系统对神经系统的影响是通过ILlβ, TNFα等细胞因子实现的，这些被称为免疫调节递质的细胞因子的激活可以引起一系列生理、行为、情感和认知的改变. 迄今为止，焦虑与其伴有的机体免疫功能改变的心身交互作用机制及其因果关系目前尚不十分清楚，有关焦虑患者免疫功能的研究结论也不一，但有许多资料表明焦虑患者确实存在免疫功能的失调，在异常免疫状态可引发焦虑. 我们观察到，在经EPM探究后即刻时间，1.2 g/kg剂量QSFK可以显著提高EPM大鼠血清IL1β，TNFα水平，对IL6影响不明显，提示QSFK可使EPM大鼠经EPM探究本已升高的细胞因子水平继续升高，推测可能与加强机体对外来刺激的防御性保护反应有关. 我们发现，QSFK可降低EPM焦虑模型大鼠βEP的释放，提高血清NO水平，推测QSFK有可能通过上述途径实现对机体免疫功能的调节，改善焦虑症可能伴有的免疫功能失调.

　　【参考文献】

　　李新田，邱财荣，杨来启，等. 芪参复康胶囊对强制冷水游泳应激大鼠行为及肾上腺Vitc含量的影响[J]. 中国药房，2007：18(增刊)：3-4.

　　徐叔云，卞如濂，陈修. 药理实验方法学[M]. 3版. 北京：人民卫生出版社，2002：817.

　　沈渔邨. 精神病学[M]. 3版. 北京：人民卫生出版社，1995：678-683.

　　钟慈声，孙安阳. 一氧化氮的生物医学[M]. 上海：上海医科大学出版社，1997：89.

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