【网学提醒】:本文主要为网上学习者提供烟草组织培养的步骤及一般方法,希望对需要烟草组织培养的步骤及一般方法网友有所帮助,学习一下吧!
资料包括: 论文(2页1358字)
说明:
植物离体培养(Plant in vitro culture)是指通过无菌操作,把植物体的各类结构材料,即外植体(Explant),接种于人工配制的培养基上,在人工控制的环境条件下,进行离体培养的一套技术与方法,通常称之为植物组织培养(Plant tissue culture),或植物的细胞与组织培养。
通过组织培养进行再生的步骤,包括培养基的制备、外植体的选择、消毒、接入,芽的诱导、根的诱导、移裁等几个阶段。
一、培养基的制备
在建立一个新的实验体系时,为了能研制出一种适合的培养基,最好先由一种已被广泛彩的基本培养基开始,烟草的培养采用的是MS基本培养基。在实际培养过程中,分为三种培养基进行使用:
1、诱导愈伤组织的培养基:MS+6-BA2+NAA0.5
2、诱导芽的培养基:MS+6-BA2+NAA0.1
3、诱导根的培养基:MS+6-BA2+IBA0.5
各种培养基所用琼脂为9g/L,蔗糖均为30g/L,PH为5.5-6.0,配制后高温灭菌备用。
二、外植体的选择
植物细胞全能性是植物细胞的一种重要属性,也是组织培养的重要理论基础。任何一个植物细胞都具有的产生一个完整植株的固有能力称做“细胞的全能性”。因此可选取烟草根、茎、叶等的任何一部分,作为组织培养的外植体。但在选择时应注意所选部位无病虫害、生长旺盛。
三、外植体的消毒及接入培养
组织培养的接种是指将灭过菌的材料,在无菌的情况下,切成小块,放入培养基的过程。
把烟草外植体放在10%次氯酸钙溶液中8分钟,再加吐温1滴,用无菌水冲洗3次;然后在0.1%升汞中浸泡5分钟,再用无菌水冲洗5次,完成对外植体的消毒。此过程在无菌室及超净工作台上进行。
消毒后,对外植体进行修剪、剪切,并接入培养基中,即可进入诱导愈伤组织的过程。培养条件一般控制在12小时光照,20±1℃。
目录:
一、培养基的制备
二、外植体的选择
三、外植体的消毒及接入培养
四、烟草芽的诱导
五、烟草根的诱导
六、移栽