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CG由北京裕恒佳科技有限公司提供,注射用尿激酶由北京赛生药业有限公司提供。实验以吸光度测定法评价UK及CGUK的活性为主线,分三部分进行: 第一部分,吸光度测定法的确立,包括1.血栓的制作方法及质控标准;2.三种不同溶栓介质及配制方法;3.试验方法——吸光度测定法,向含有血栓的试管中加入一定浓度UK或CGUK溶液,开始计时,在0min,30min,60min,90min,120min, 150min时分别以一定量蒸馏水灌洗(蒸馏水量由溶栓介质决定),收集灌洗液,用分光光度计在 540nm 波长测每份灌洗液的吸光度值(OD)。4.数据统计,计算溶栓率,并做UK溶栓率——时间曲线图。 第二部分,吸光度测定法在检测溶栓剂活性方面的应用,采用吸光度测定法评价体外 UK 及 CGUK 活性。实验分组如下:1.采用吸光度测定法测定五种不同浓度 UK的不同时间点动态溶栓活性;
评价CG是否对吸光度测定法所建立的实验体系有影响;3.既定UK浓度分别加入三种不同浓度的CG,采用吸光度测定法测定 CGUK不同时间点动态溶栓活性,观察CG对UK活性的影响;4.采用全血或血浆作为溶栓介质,观察不同溶栓介质是否对试验体系有影响。所得数据经过单因素第三部分 动物体内实验,将8只新西兰兔做自身对照按照给药种类不同分为两组,第一组:UK 组;第二组:CGUK 组,剥离兔两侧颈静脉,于静脉给药后 5min, 10min,15min,20min,60min,120min采血。将采出血加入制备好的一组血栓,在10min,30min,50min后用100ml蒸馏水灌洗,收集灌洗液,测定吸光度值。计算溶栓率及酶活力u值,做配对差值t检验,比较UK组与CGUK组不同时间点的差异。
体外部分,经单因素方差检验,吸光度测定法可以灵敏的检测UK8、UK4、UK2 三种浓度梯度的活性。CG对UK活性的控制只有在二者比例满足一定范围内才有明显作用,UK3组的CG3UK3、CG1.5UK3中,UK4组的CG3UK4中CG对UK 活性的发挥有明显的控制作用。CG无溶栓或溶血作用,且在540nm吸光度值与生理盐水无统计学差异,可以认为对吸光度测定法实验体系无影响。
全血、血浆与生理盐水分别作为溶栓介质,用吸光度测定法测定的一定活性浓度的UK或CGUK 的溶栓率是相似的,没有统计学上的差别。吸光度测定法还可以应用到全血、血浆作为溶栓介质的环境中评价UK或CGUK的活性。 体内部分,吸光度测定法能稳定的测定体内UK和CGUK既定时间的活性变化。 UK组与CGUK组中表示酶活力的u值采用配对差值t检验,实验前20min数据无明显统计学差别,60min、120min数据有明显统计学差别,说明当CG与UK的比例在一定范围内时,CG有延长UK显效时间的作用,而对UK的活性浓度峰值没有明显控制作用。