整和素α5、β1在鼻息肉组织中的表达及意义
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说明：
【摘要】 目的 探讨整和素α5、β1在鼻息肉组织中的表达及其与嗜酸粒细胞凋亡的相关性。方法 采用流式细胞法检测糖皮质激素治疗前后的鼻息肉组织（13例）中整和素α5、β1含量及凋亡的嗜酸粒细胞，并与7例健康人下鼻甲黏膜检测结果进行比较。结果 鼻息肉组织中有大量嗜酸粒细胞浸润，明显高于下鼻甲黏膜组；整和素α5、β1主要表达在嗜酸粒细胞，其次在血管内皮细胞也有表达；鼻息肉组织中嗜酸粒细胞表面均有整和素α5、β1表达，而下鼻甲黏膜组只有2例有整和素α5、β1表达，两组标本嗜酸粒细胞中整和素α5、β1的表达差异有显著性（P<0.05）；激素治疗后鼻息肉中整和素α5、β1的表达有下降趋势，但差异无显著性（P>0.05）。结论 整和素α5、β1在鼻息肉中高表达，但对嗜酸粒细胞凋亡的影响尚不能得出有意义的结论。
【关键词】 整和素α5、β1；鼻息肉；嗜酸粒细胞；凋亡
鼻息肉是鼻部的常见病，发病率1%～4%［1］，具体的发病机制仍未完全阐明。嗜酸粒细胞增多是其主要的病理特征，也是发病的关键。组织对嗜酸粒细胞的清除是依靠自身的凋亡作用来完成的。本研究采用流式细胞术（flow cytometry，FCM）检测糖皮质激素治疗前后鼻息肉组织中整和素α5、β1表达情况，并分析其在鼻息肉嗜酸粒细胞聚集及凋亡过程中的作用。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2003年9月～2005年12月依据海口标准［2］诊断为慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者13例，均为Ⅱ型1～3期。男8例，女5例，年龄17～63岁，平均46.7岁。同时期住院行鼻中隔黏膜下切除术患者下鼻甲黏膜标本7例。男5例，女2例，年龄21～39岁，平均29.7岁。
1.2 标本收集 所有患者经变应原试验确定无变应性鼻炎病史，就诊前至少1个月未用过激素及抗组胺药物治疗。鼻息肉患者一经确诊，咬取小块息肉组织备用，然后进行激素治疗：丙酸氟替卡松喷鼻200μg/喷，2喷/次，1次/d，连续4周。4周后给予鼻息肉摘除手术，留取息肉组织标本备用。下鼻甲黏膜在患者手术时取得。所有标本均分2份。
1.3 主要试剂和仪器 整和素α5、β1鼠抗人单克隆抗体购自博士德公司，苏木精-伊红（HE）染色剂、离心机（国产LDZ5-2型）、流式细胞仪（美国库尔特公司FAScan-420型产品）及其配套软件均由河北医大四院肿瘤研究所提供。
1.4 检测方法 所有标本经10%福尔马林固定，按常规制成石蜡块保存备用。检测时一组蜡块制成5μm厚的石蜡切片，常规HE染色，200倍光镜下记数炎症细胞高分区嗜酸粒细胞的数量。另一组标本常规脱蜡至水后，取5g组织用眼科剪刀在260目尼龙网上制成单细胞悬液，用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗1次，离心1500r/min， 5min，弃上清液，重复上述冲洗、离心步骤，复制体积为0.2ml含1×105单细胞悬液，分2管，一管为PE标记鼠抗人α5、β1单克隆抗体，另一管为IgG PE阴性对照抗体。每管放0.1ml单细胞悬液充分混匀后室温暗处静置15min，每管加20ml PBS，上机检测。流式细胞仪检测时使用激发波488nm，横轴为绿荧光，纵轴为90°侧向散射光，记数5000个，在直方图上，以PE标记IgG对照单抗调整并确定电压及放大倍数。
凋亡检测采用APO 2.7标记法取1×106个细胞，加入digitonin（sigma），冰浴20min，用冷PBSF冲洗1遍，加20ml APO2.7-PE，震荡、混匀，室温避光15min，用PBSF冲洗1遍，弃上清液，重悬，避光至上机检测。
1.5 统计学分析 实验结果采用统计软件SAS 6.0进行分析，用t检验进行统计学分析。
2 结果
13例激素治疗前鼻息肉标本中均有大量嗜酸粒细胞浸润，下鼻甲黏膜中虽有嗜酸粒细胞浸润，但数量明显少于鼻息肉组织；激素治疗后的鼻息肉标本中嗜酸粒细胞明显减少，但仍高于下鼻甲黏膜。整和素α5、β1主要在嗜酸粒细胞中表达，在血管内皮细胞中亦可见整和素α5、β1表达；在鼻息肉组织中的表达明显高于下鼻甲黏膜，两者差异有显著性（P<0.05）；在糖皮质激素治疗后的鼻息肉组织中整和素α5、β1的表达略较治疗前的鼻息肉组织中减少，但两者差异无显著性（P>0.05）。
1 资料与方法
2 结果
3 讨论
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