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彩超在小鼠原位肝癌移植模型中的应用研究

来源:http://myeducs.cn 联系QQ:点击这里给我发消息 作者: 用户投稿 发布时间: 09/12/12

  摘要:

  目的:

  研究应用彩超评价小鼠原位肝癌移植造模成功的可行性。方法:建立小鼠肝癌原位移植模型, 应用彩超方法观察(3、5、9、16d)不同造模时间小鼠肝癌原位移植造模情况,同时与解剖观察肿瘤比较;并取 其肿瘤作病理组织学检查。结果:彩超在模型建立中后期9d组肿瘤的检测结果与解剖观察情况相近,肿瘤检出率 可达90%。结论:彩超检测方法是一种无创诊断,可用于小鼠原位肝癌模型的实时评价,为建立小鼠原位移植肝癌 模型的判定提供科学依据.

  关键词:彩超;小鼠原位肝癌;模型

  目前,肝癌治疗措施强调实行综合治疗,即通过 西医、中医及其他有效的手段和方法相结合的综合 治疗。中医药在防治肝癌发生,减少复发,减轻放、 化疗的毒副作用,提高生存质量,延长生存期等方面 有独特的优势,随着医药科技的发展,中医药治疗肝 癌的临床疗效不断提高,并且也从多方面展开药物 作用机理的研究。本文开展应用现代临床医疗的彩 超技术评价小鼠肝癌原位移植模型,试图为中医药 临床防治肝癌药物的药效实验研究提供研究手段及 其新的评价方法。本研究也是国家自然基金项目中 药复方靶向给药系统研究的一部分.

  材料与方法

  1.实验材料小鼠H22肝癌瘤株:中国协和药 物所提供;清洁级ICR/b鼠,雄性,6—8周龄,体质量 18—229:由吉林大学实验动物中心提供,动物合格证 号10—1023;BCN一1 360超净1=作台Jouan公司;KX一41 倒置生物旺微镜,日本OLYMPUS生产;IU22彩超机, Phllips公司.

  2.实验方法

  2.1小鼠原位肝癌模型的建立及分组取腹腔 接种H22肝癌细胞株后7d的昆明种小鼠。无菌抽取H22 肝癌细胞株腹水,生理盐水洗涤,离一31 000 r/rain,5min 弃上清,台盼蓝染色计数,生理盐水调整癌细胞数至 1×108/ml备用。健康昆明种小鼠,戊巴比妥钠腹腔注 射麻醉,小鼠仰卧固定,备皮,常规消毒铺巾,于上腹正 中剑突下作一约Icm的切口。轻压双侧肋弓以挤出部分肝叶,湿纱布垫于肝叶下方以保护’然后用0.25ml医 用注射器针头沿肝叶长轴方向插人缓慢注入H22肝 癌细胞悬液0.03ml(细胞数为3×106)。在拔出针头的 同时,迅速用棉签轻压lmin止血,然后在针眼周嗣用 酒精棉球轻搽。小心地将肝脏网纳入腹腔,缝合切口, 术毕【lI。术后正常饮水、进食。术后将造模动物随机4 组,即模型3d组,模型5d组,模型9d组,模型16d组, 另设正常对照组。正常组动物同样手术方法给予生 理盐水造模.

  2.2彩超对小鼠肝癌造模的检测实验动物分4 次进行B超检测,每次取5只正常组进行对照,分别于 造模第3、5、9、16H将正常对照组和模型组小鼠腹部 剪毛处理,用彩超仪对小鼠肝脏进行扫描,选择最 适宜条件。彩超检测条件:深度:2.0,增益指数74%, 探头频率7.5—12MHz。随后,脱椎处死小鼠,开腹用 游标卡尺测量肿瘤大小,并与彩超结果进行对照.

  2.3病理形态学观察剥离肝脏及其肿瘤,10% 甲醛固定,常规石蜡包埋,切片,HE染色,在光学显 微镜下进行组织学检查.

  结果

  1.彩超检测与解剖肉眼观察结果正常组小鼠 肝脏彩超检测结果表明:超声显示弱回声,无结节; 正常小鼠解剖肝脏表明:肝脏无结节。模型组小鼠肝 脏超声与解剖检测结果表明:小鼠原位移植肝癌存 在高回声、等回声、低回声3种类型,其中以高回声多 见并较易发现和测量。当肿瘤生长3d时,有50%/b鼠 生长出平均0.2cm×0.14cm大小的结节,此ft,寸B超显 示10只小鼠均无结节;当造模第5天时,有lOO%/Jx鼠 长出平均o.57cmx0.43em大小不等的结节或肿块,并 有1只呈弥漫性生长,彩超仅检查出一只实际大小在 0.29emx0.29em的肿瘤,检出率占总数的10%;当造 模第9天时,有100%/1\"鼠长出平均0.89cmx0.43era, 彩超的检出率可达90%;至第16天时,有100%d、鼠长 出0.89emx0.66em的肿瘤并且小鼠多伴有腹水,此时 彩超的检出率仍为90%。结果见表l、图l.

  表1 彩超与解剖观察不问时间小鼠原位移植肝癌情况∞=10) 彩超检查解剖观察造模天数丽面天万可忑夏二了蕊丽看夭不ii忑i再再薄 2.病理学检测结果正常组小鼠肝d,nf清晰, 肝细胞索、肝窦排列整齐,汇管区结构清楚;肝癌模 型组肿瘤细胞生长旺盛,较为弥散,细胞核体积较 大,深染,多呈圆形或椭圆形,胞浆丰富略嗜碱性, 有的胞浆呈空泡状,可见病理性核分裂与瘤巨细胞, 见图1.

  讨论

  目前,建立小鼠肝癌动物模型方法主要有皮下 移植和肝癌的原位移植,而肝癌的原位移植能够更 好地模仿人肝癌体内的血供和生长环境,提供与肝 癌病人相似的肝癌生物学特性,更好地反映抗癌药 物的药效学指标。但此种方法要求接种手法准确, 对操作环境要求必须无菌,尤其此种模型建立是否 成功常采用动物处死后评价。这是大多数研究者谨 慎采用此方法的原因之?。目前,采用小鼠原位肝癌 移植模型进行抗肿瘤药物研究,缺少行之有效的模 型建立评价方法.

  彩超是根据形态学的改变为临床诊断疾病提供证据的,它不像病理那样作出准确的诊断,但一些疾 病在超声显像中有特殊表现,并且具有活体、实时、 动态的优点。肝癌的声像图有其规律性,根据这些变 化的规律,目前临床上彩超检查是常用的诊断方法。上常用的彩超机对于实验有使用方便,容易获 得的优点,因此,本实验用临床用彩超机对小鼠原位 移植肝肿瘤模型建立进行评价,探讨用其评价小鼠 原位肝肿瘤的可行性.

  实验结果表明:彩超在对小鼠原位肝癌移植模型 建立的初期(0-5天)评价效果并不理想,检出率仅为 10%,但在肿瘤生长成熟期(大于0.57era x 0.43era)对 肿瘤的检出率有了明显的提高,检出率可达到90%.

  临床用彩超机在小鼠原位肝癌移植模型的建立过程 中适用于肿瘤成熟期的评价.临床用彩超机探头的常用频率范围为l一15 MHz,最高频率为40 MHz,而用于小动物实验检测的 高频率超声系统探头频率为12.5—82.5MHz,平均中 心频率为40 MHz,本实验发现临床用彩超机探头频 率较低,因此如能够采用高频率的探头将会提高实 验的检出率和准确度.

  对小鼠原位肝癌移植模型的评价采用彩超手段 是一种无创诊断和监澳fl/b鼠肝癌原位肿瘤的可行检 测方法,可为中医临床防治肝癌药物实验用小鼠肝 癌原位肿瘤模型建立的判断提供科学依据。此检测 方法也可用于其它实验动物肝癌模型建立的评价.

  参考文献

  【l】李志字,薛华,何生,等.葡萄球菌肠毒素A脂质体对小鼠原位移 植m2肝癌的治疗作用.中华肝胆外科杂志嬲,10(10阳B,_6% LI Zhi?yu,XUE Hua,HE Sheng,et a1.Antitumor efficacy of staphylococcal enterotoxin A liposomesin vivo.China J Hepatobiliary su玛2004,l()(10):683-686

  【2】农木本.B超诊断肝癌1 12例分析.左江民族医学院学报,1995, 17(1):46-47

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