中药八角茴香质量控制研究
资料包括： 论文(61页22490字) 图纸
说明：
摘要：八角茴香为木兰科八角属植物八角茴香Illicium verum Hook．f．的干燥成熟果实，现作为常用中药收载于2005年版《中国药典》一部。本研究以八角茴香药材为研究对象，收集了不同产地、不同批次的八角茴香样品19个，建立了药材中多个活性成分的含量测定方法，同时建立了八角茴香挥发油的GC指纹图谱，从而系统、全面地研究了八角茴香药材的质量控制方法。
1. 以八角茴香油为指标性成分，通过正交试验考察了药材的粉碎粒度、溶剂用量、浸泡时间和提取时间4个因素，优化了八角茴香挥发油的提取工艺。
2. 采用气相色谱内标法对9批不同产的的八角茴香样品中的反式茴香醚成分进行了含量测定。使用DB-1毛细管气相色谱柱（30m×0.25mm×0.25μm），采用程序升温。反式茴香醚在0.34～2.38μg﹒μL-1 （r=0.9998，n=6）浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。方法平均回收率为99.7%（RSD=3.7%）。本方法简便、准确、重复性好，为全面评价八角茴香药材质量提供了定量依据。
3. 采用紫外分光光度法对9批不同产地的八角茴香样品中的莽草酸进行了含量测定。在213nm波长下测定吸光度，计算莽草酸含量，莽草酸在2.8～16.8μg﹒mL-1 （r=0.9997，n=6）浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系。方法平均回收率为99.6（RSD=1.5）。本方法简便易行、快速、准确，可以作为八角茴香质量控制指标之一。
4．采用GC-MS对八角茴香挥发油的化学成分进行分析，其中反式茴香醚的含量最高。进而利用毛细管气相色谱法建立八角茴香挥发油的指纹图谱。采用DB-1毛细管气相色谱柱（30m×0.25mm×0.25μm），使用程序升温，在50min内，温度从70℃以2 ℃﹒min-1的速率线性升至200 ℃，并在70℃和200℃分别维持5 min。检测器为氢火焰离子化检测器，检测温度为250 ℃。对19批八角茴香挥发油样品进行GC色谱指纹图谱分析，共获得20个特征峰。然后对挥发油色谱指纹图谱所得数据进行聚类分析，19批药材分成4类，其中一类和二类为推荐品。选取11产地的推荐品药材图谱建立共有模式，并计算各产地样品的相似度。结果表明，推荐品的相似度大于0.90。
关键词:中药材；八角茴香，质量控制，毛细管气相色谱法，气相色谱一质谱联用，
色谱指纹图谱
ABSTRACT ：The dried and ripe fruit of Illicium verum Hook．f．，which is widely used in clinic，is listed in the chinese Pharmacopoeia as an important Traditional Chinese Medicine (TCM).19 samples were collected from different habitats and different butches and the quality control was developed.The present study determine the major biological components in Illicium verum Hook．f．and simultaneously provides the GC fingerprint chromatogram of the essential oil from Illicium verum Hook．f．. Subsequently, the systematic quality evaluation of Illicium verum Hook．f． was developed.
1．The extraction technology of the effective components of the raw materials was studied by
an orthogonal design using content of the major effective component the essential oil and the volume of extract as markers,reviewing screen mesh, the solvent quantity,soaking time and the extraction time.
2．Trans-anethol were determined by gas chromatography（GC）.DB-1 capillary column （30m×0.25mm×0.25μm）was used,and the program was 70℃（5min）2℃∕min200℃（5min）with the FID detection.By internal standardization method，the calibration curve of trans-anethol was
linear over the range of 0.34～2.38μg﹒μL-1 （r=0.9998, n=6）. The mean recoveries were 99.7%（RSD=3.7%）. The assay was found to be simple and accurate to measure the concentrations of trans-anethol in Illicium verum Hook．f．
3．The concentration of shikimic acid in Illicium verum Hook．f．was determined with ultraviolet spectrophotometry.The absorbance of shikimic acid was determined at 213 nm. The calibration curve of shikimic acid was linear over the range of 2.8～16.8μg﹒mL-1 （r=0.9997，n=6）. The mean recoveries were 99.6%（RSD=1.5%）. The assay was found to be simple ,fast and accurate to measure the concentrations of shikimic acid in Illicium verum Hook．f．So it can be used as one of the method to control the quality of the raw materials.
4．The chemical composition of th essential oil from Illicium verum Hook．f．was determined by the means of GC-MS. Trans-anethol was the highest content. Gas chromatography was used to establish fingerprint of the essential oil from Illicium verum Hook．f．DB-1 capillary column （30m×0.25mm×0.25μm）was used,and the program was 70℃（5min）2℃∕min200℃（5min）with the FID detection, with the FID detection. 19 batches of the raw materials were divided into four grades by the Hierarchical cluster. Mutual pattern was established from 11batches in the grade I and Ⅱ,the similarity data were also obtained. These results of the commendatory should be all over 0.90.
Key Word: Chinese traditional herb; Illicium verum Hook．f．; Quality control; GC; GC-MS; Fingerprint chromatogram
第一章 前言
1.1中药质量控制研究现状
中医药学是中国劳动人民在与疾病作斗争的过程中创造、丰富和发展起来的。中医药学从起源到形成独特完整的理论体系，经历了几千年的历史，是中国古代科学技术中保存最完整、最具实际效益和生命力的学科之一，是中华民族五千年灿烂文化的瑰宝。近年来，随着全球性“回归自然”与“中医中药热”热潮不断高涨，中医中药在世界各地的声誉和影响也越来越大，传统中药也走出国门被越来越多的人们所认知和接受，成为国家外汇收入的一个重要来源。但是中药资源广阔，成分复杂，质量易受生长环境等因素的影响，所以，建立被现代医药所普遍认知的标准来控制中药质量对于中药国际化(安全性、有效性和可控性)的发展具有重要的意义。
中文摘要 ………………………………………………………………………………1
英文摘要 ………………………………………………………………………………2
第一章 前言 …………………………………………………………………………4
1.1中药质量控制研究现状 …………………………………………………4
1.2中药质量的色谱指纹图谱评价方法 ……………………………………5
1.3中药八角茴香研究概况 …………………………………………………7
1.4立题依据和研究思路 …………………………………………………10
第二章 挥发油含量测定 ……………………………………………………………11
2.1仪器与试剂 ……………………………………………………………11
2.2样品的收集和与处理 …………………………………………………11
2.3八角茴香挥发油提取工艺的确定 ……………………………………12
2.4 19批八角茴香原料药材中挥发油含量的测定 ………………………14
2.5小结 ……………………………………………………………………15
第三章 气相色谱内标法测定八角茴香油中反式茴香醚的含量 …………………16
3.1仪器、试剂与药品 ………………………………………………………16
3.2样品的收集与预处理 …………………………………………………16
3.3气相色谱条件 …………………………………………………………17
3.4内标物的确定 …………………………………………………………17
3.5对照品溶液制备 ………………………………………………………17
3.6内标溶液制备 …………………………………………………………17
3.7供试品溶液制备 ………………………………………………………17
3.8标准曲线绘制 …………………………………………………………18
3.9精密度实验 ……………………………………………………………19
3.10方法重复性实验 ………………………………………………………19
3.11稳定性实验 ……………………………………………………………19
3.12回收率实验 ……………………………………………………………19
3.13样品测定 ………………………………………………………………20
3.14小结 ……………………………………………………………………20
第四章 莽草酸含量的测定 …………………………………………………………21
4.1仪器、试剂与药品 ………………………………………………………21
4.2 样品的收集与预处理 …………………………………………………21
4.3提取方法 ………………………………………………………………21
4.4 检测波长的选择 ………………………………………………………21
4.5 对照品溶液制备 ………………………………………………………22
4.6 供试品溶液制备 ………………………………………………………22
4.7 标准曲线绘制 …………………………………………………………22
4.8 精密度实验 ……………………………………………………………23
4.9方法重复性实验 ………………………………………………………23
4.10回收率实验 ……………………………………………………………23
4.11 样品测定 ………………………………………………………………24
4.12 小结 ……………………………………………………………………24
第五章 八角茴香气相色谱指纹图谱研究 …………………………………………25
5.1 仪器、试剂、药品和样品 ………………………………………………25
5.2 总离子流图的获得 ……………………………………………………25
5.3 挥发油气相色谱指纹图谱研究 ………………………………………26
第六章 结果与讨论 …………………………………………………………………38
致谢 ……………………………………………………………………………………39
参考文献 ………………………………………………………………………………40
附录 ……………………………………………………………………………………42
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作者点评：
本研究以八角茴香药材为研究对象，收集了不同产地、不同批次的八角茴香样品19个，建立了药材中多个活性成分的含量测定方法，同时建立了八角茴香挥发油的GC指纹图谱，从而系统、全面地研究了八角茴香药材的质量控制方法。
1．通过正交试验确定了八角茴香油的最佳提取工艺为药材粉碎过40目筛，10倍溶剂，提取3小时的实验条件，并通过验证试验也证明该提取工艺准确、合理。采用本提取工艺，测定了19批八角茴香挥发性化合物的含量。试验结果表明：除18号样品外，总挥发油的含量为0.0750～0.1250 mL/g ，其中安徽的八角茴香中的挥发油含量最高为，0.1250 mL/g；云南和福建的八角茴香中挥发油的含量较低，分别为0.0780 mL/g， 0.0750 mL/g。不同产地的八角茴香药材中挥发油的含量差异比较大，但都能符合《中国药典》2005版一部中的要求。这些差异可能是由产地、生产环境、采收期和储藏方法等不同原因引起的。18号样品经性状和显微鉴别，鉴定为莽草（Illicium lanceolatum A.C.Smith），通过对伪品莽草中挥发油含量的测定，发现其挥发油含量很低为0.0198 mL/g。
2．采用气相色谱法的内标法测定了9个不同产地的八角茴香药材挥发油中主要化学成分反式茴香醚的含量。测定结果表明，湖南八角茴香药材挥发油中反式茴香醚含量最高为0.85 g/g；云南八角茴香药材样品的挥发油中反式茴香醚的含量最低为0.63 g/g。为药材的合理采收和储藏提供了依据。同时该方法为八角茴香油的定量方法提供了依据，可以反映出不同产地八角茴香药材的质量差别，有利于鉴定药材的优劣，可以对药材的质量进行全面控制。
3．利用紫外分光光度法测定了不同产地八角茴香药材中莽草酸的含量，作为药材的质量控制指标之一，方法简便、准确、重复性好。含量测定结果表明，莽草酸的含量为60.2 mg/g～118.3 mg/g。
4.八角茴香油是八角茴香药材的主要化学成分，并具有较高的药理活性，因此本研究建立了八角茴香挥发油的质量控制方法。首先利用GC-MS对挥发油成分进行了分析，得到八角茴香挥发油的总离子流图，由计算机检索和标准谱图对照，鉴定了单体化学成分反式茴香醚，且该成分的含量最高。进而又建立了八角茴香挥发油的GC色谱指纹图谱，共获得20个特征峰。将19批样品的GC指纹图谱进行聚类分析，将八角茴香样品分为4类，结合形态学鉴定结果，判定第I类和第II类样品为优质药材，并根据聚类结果，选取推荐品中的11批样品建立共有模式，进而计算相似度数据。
5．系统聚类分析是一种无管理、无指导的模式识别方法，依据所测样品的色谱指纹图谱特征，对样品进行分类。系统聚类分析可与专家生药鉴定结果相结合，对中药色谱指纹图谱质量评价过程中共有模式药材的选取具有一定的指导意义:可选择聚类分析中列为推荐药材的一类样品建立共有模式。在应用SPSS软件进行聚类分析时，聚类方法及测度的选择可以直接影响样品聚类的结果，本研究使用类内平均链锁法(Within-groups linkage)，并利用欧氏距离平方 (Squared Euclidean distance)作为样品测度，这种聚类方法和测度在指纹图谱研究中较为常用，而且在本研究中，应用此方法和测度的聚类结果与专家鉴别结果和直观分析结果都最为一致，所以采用。
6.本研究在优化了八角茴香油提取工艺的基础上，从挥发油的含量测定，挥发油中主要化学成分反式茴香醚的含量测定和GC指纹图谱多个方面对中药八角茴香的质量控制方法进行了全面而系统的研究。由于这些方法所针对的研究对象各有不同，在今后的研究中，可以将这些质量控制方法与八角茴香的药理学研究相结合，综合评价药材质量。